方法

概念

優(yōu)點

缺點

適用場景

直接法

讓酶偶聯(lián)會在表面結(jié)合抗原的抗體。

實驗步驟少，可簡化試驗。

1.需要制備在每個實驗中用來檢測的各種偶聯(lián)抗體。

2.包被抗原會非特異性地結(jié)合表面，因此他可能會在非天然結(jié)構(gòu)中被呈遞給抗體從而導(dǎo)致更強的背景信號。

1.適合測定樣品中的抗體量，比如感染后的血清抗體水平；2.不適合多種抗體的分析。

間接法

類似于直接ELISA，但不偶聯(lián)抗體。使用第二偶聯(lián)抗體來檢測結(jié)合的抗體。

1.在所有不同的實驗中使用相同物種的結(jié)合抗體的情況下，可以使用偶聯(lián)的第二抗體來進行多個實驗。

2. 由于二抗一般分為多抗，因此，一個一抗分子上可以結(jié)合多個二抗分子。同時，一個二抗分子上可以標記多個酶分子，所以當待測抗體為多抗時，信號經(jīng)過兩步放大，*終提高了檢測的靈敏度。

3.由于二抗制備比較容易，而且很早就開始商品化，所以操作者無需將一抗進行酶標，大大縮減了工作量。

1.實驗步驟耗時更長，更容易出錯。

2.會有更強的背景信號，因為所需的試劑數(shù)量更多，每一種都可能會出現(xiàn)非特異性結(jié)合。

1.檢測抗體的效價，血清的效價以及單克隆抗體的篩選。

2.檢測標志性抗體。

直接夾心法

直接將抗原固定在固相上。

更具有特異性。

需要開發(fā)適合實驗的“匹配組”抗體，費錢且耗時。

只能用于識別具有兩個或兩個以上標位的抗體。

間接夾心法

將捕獲抗體固定在固相上以捕獲抗原。

1.進一步放大了信號，提高了靈敏性。

2.由于酶標二抗僅能識別檢測抗體，提高了體系的特異性。

配置“實驗組”費錢且耗時。

只能用于識別具有兩個或兩個以上標位的抗體。

競爭法

讓抗體競爭性的或抑制抗體結(jié)合實測數(shù)量的抗原來進行定量。

檢測速度快。

需要較多量的酶標記抗原。

只有一個結(jié)合部位的抗原，對小分子抗原如激素和藥物等的測定常用這種方法。