細胞凍存的基本原理： 慢凍

手動降溫：將細胞依序放在4℃（30分鐘）、-20℃（1小時）、-80℃（*）后移至液氮中保存。

程序降溫盒：是一般*廣泛使用的降溫法，為一種特制冷凍容器（填充異丙醇或依靠特制金屬導熱），使細胞以每分鐘約-1℃的速度降至-80℃（*），然后移至液氮中保存。

大家可以根據(jù)自身情況或者實驗條件選擇不同的凍存方式。

細胞凍存是細胞保存的主要方法。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。

細胞代謝過程需要各種蛋白酶的參與，而這些蛋白酶在環(huán)境溫度低于-70℃時會集體罷工，低溫貯藏的目的是通過低溫使代謝活動近乎停止。細胞因此進入休眠狀態(tài)，使細胞“不會老”，可以長期保存。

因為凍融過程對所有細胞和組織都是有一定傷害的，因此，需要開發(fā)出有效的技術(shù)來防止細胞死亡和損傷。

這時，低溫保護劑就發(fā)揮出它的作用了。

低溫保護劑可保護細胞不受細胞內(nèi)冰凍影響，目前多采用DMSO、甘油、*和丙二醇等滲透型低溫保護劑。它們的作用機制包括：自由進入細胞，取代水，使冰點下降，充當鹽的二次溶劑，提高細胞膜對水的通透性。

但是，部分低溫保護劑在緩慢冷凍過程中雖然會保護細胞，但它們也會引起細胞毒性，尤其是在室溫下。因此，在標準的自制凍存液中，會含有血清，血清是用來降低細胞毒性的，但血清也不是*的。