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凍存的細(xì)胞開(kāi)始培養(yǎng)具體過(guò)程:
1、將一管細(xì)胞從液氮罐中取出,注意保護(hù)手和眼睛。
2、將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉(zhuǎn),直到管內(nèi)物體完全融化。
3、 將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉(zhuǎn)入無(wú)菌環(huán)境。
4、 用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。
5、打開(kāi)蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負(fù)壓,開(kāi)蓋時(shí)可能會(huì)有少量溢出,這是正?,F(xiàn)象)。
6、用多聚賴(lài)氨酸(或參照說(shuō)明書(shū))包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細(xì)胞的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細(xì)胞。
7、 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開(kāi)蓋子。
8、將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中(37℃,5%CO2,95%空氣)
9、放入培養(yǎng)箱后第6-16小時(shí)更換一次培養(yǎng)基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。
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